LIP2000轉(zhuǎn)染試劑
4°C儲(chǔ)存 ，避光保存2年
lip2000高效DNA TR是一種新型的陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑適合于將核酸DNA轉(zhuǎn)染入真核細(xì)胞，具有低細(xì)胞毒性；對(duì)多種類型的細(xì)胞都具有高轉(zhuǎn)染效率；轉(zhuǎn)染時(shí)血清的存在不影響轉(zhuǎn)染效率的優(yōu)點(diǎn)。
lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染試劑對(duì)于常見的哺乳動(dòng)物細(xì)胞具有非常高的轉(zhuǎn)染效率、重復(fù)性好、操作簡(jiǎn)單、無明顯的細(xì)胞毒性，并且對(duì)于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞都適用。
lip2000高效DNA TR主要適用于DNA 等單一成分的細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染過表達(dá)質(zhì)粒后，通常24～48 h后達(dá)到較高的蛋白表達(dá)水平，并且很多情況下蛋白表達(dá)量在轉(zhuǎn)染后48 h 顯著高于轉(zhuǎn)染后24 h。
lip2000高效DNA TR轉(zhuǎn)染細(xì)胞時(shí)，基本不受細(xì)胞培養(yǎng)液中血清影響，即可以在血清存在的情況下進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。但為了取得最佳的轉(zhuǎn)染效果，推薦轉(zhuǎn)染時(shí)使用不含抗生素培養(yǎng)液。轉(zhuǎn)染后不必去除轉(zhuǎn)染液，或者改變或添加培養(yǎng)基，但轉(zhuǎn)染4～6 h 后可去除轉(zhuǎn)染液。
產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 |
Lip2000轉(zhuǎn)染試劑 | HZ-015 | 1.5ml |
使用方法DNA轉(zhuǎn)染
對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來說，DNA (ug) 與lip2000高效DNA TR (ul) 的比例為1:2~1:3。轉(zhuǎn)染時(shí)高的細(xì)胞密度可以得到高的轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)水平，并能減少細(xì)胞毒性。
1. 以24孔板為例
貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，用500 ul不含抗生素的培養(yǎng)基接種0.5～2×105 細(xì)胞，使之第二天能達(dá)到80～90% 融合。
懸浮細(xì)胞：在準(zhǔn)備DNA-TR LIP2000 DNA復(fù)合物之前，用500 ul不含抗生素的培養(yǎng)基接種4～8×105 細(xì)胞即可。
2. 對(duì)每個(gè)轉(zhuǎn)染樣品，進(jìn)行以下操作
a. 在 eppendorf 管里分別加入50 ul Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 ug DNA輕柔混勻（不能渦旋或離心），制成DNA稀釋液。
b. 在另一個(gè)eppendorf管里分別加入50 ul Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和2.0 ul lip2000高效DNA TR（注意用前先混勻），輕柔混勻，制成lip2000高效DNA TR 稀釋液，室溫靜置5分鐘。
c. 將DNA稀釋液和lip2000高效DNA TR稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置20分鐘，形成DNA-lip2000高效DNA TR復(fù)合物。DNA - lip2000高效DNA TR復(fù)合物在室溫下可穩(wěn)定存在6小時(shí)。
3. 將DNA-lip2000高效DNA TR復(fù)合物加入到接種好的細(xì)胞中，將培養(yǎng)板輕輕地前后搖動(dòng)，使復(fù)合物分散均勻。
4. 在37℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～6小時(shí)后更換培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)18～48小時(shí)。
5. 如果要篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，則在轉(zhuǎn)染24小時(shí)后將細(xì)胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養(yǎng)基中，第二天加入選擇性培養(yǎng)基進(jìn)行篩選。
優(yōu)化DNA轉(zhuǎn)染
質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染的優(yōu)化為達(dá)到最高的轉(zhuǎn)染效率和降低細(xì)胞毒性的影響，可以對(duì)DNA和lip2000高效DNA TR的比例以及細(xì)胞密度進(jìn)行優(yōu)化，一般在1:0.5~1:5的范圍內(nèi)優(yōu)化DNA（ug）和lip2000高效DNA TR（ul） 的比例。
不同細(xì)胞培養(yǎng)板中轉(zhuǎn)染時(shí)培養(yǎng)基、核酸及lip2000高效DNA TR用量
細(xì)胞培養(yǎng)板 | 每孔面積 | 培養(yǎng)基用量 | DNA轉(zhuǎn)染 |
鋪板培養(yǎng)基 | 稀釋培養(yǎng)基 | DNA | 轉(zhuǎn)染試劑 |
96 well | 0.3 cm2 | 100 ul | 2×25 ul | 0.2 ug | 0.5 ul |
24 well | 2 cm2 | 500 ul | 2×50 ul | 0.8 ug | 2.0 ul |
12 well | 4 cm2 | 1 ml | 2×100 ul | 1.6 ug | 4.0 ul |
6 well | 10 cm2 | 2 ml | 2×250 ul | 4.0 ug | 10 ul |
60 mm | 20 cm2 | 5 ml | 2×0.5 ml | 8.0 ug | 20 ul |
10 cm | 60 cm2 | 15 ml | 2×1.5 ml | 24 ug | 60 ul |
Lip轉(zhuǎn)染試劑用于不同細(xì)胞轉(zhuǎn)染時(shí)用量參考（以.96孔板為例）
細(xì)胞型號(hào) | 培養(yǎng)基 | 每孔細(xì)胞數(shù) | DNA的量 | 轉(zhuǎn)染試劑量 |
293H | DMEM | 3×104 | 0.2 ug | 0.5 ul |
293FT | DMEM | 3×104 | 0.2 ug | 0.5 ul |
293E | DMEM | 3×104 | 0.2 ug | 0.5 ul |
293F | DMEM | 3×104 | 0.2 ug | 0.5 ul |
COS7 | DMEM | 1.5×104 | 0.4 ug | 0.5 ul |
hela | DMEM | 2×104 | 0.3 ug | 0.5 ul |
Caco2 | MEM | 3.5×104 | 0.3 ug | 0.75 ul |
BHK21 | MEM | 2×104 | 0.2 ug | 0.5 ul |
CHO-DG44 | DMEM+HT+pro | 2×104 | 0.5 ug | 0.5 ul |
RAW264.7 | DMEM | 3×104 | 0.2 ug | 0.5 ul |
注意事項(xiàng)
1.使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉(zhuǎn)染效率。
2.轉(zhuǎn)染前細(xì)胞必須處于良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。
3.需自備不含抗生素的無血清培養(yǎng)液或Opti-MEM?培養(yǎng)液或普通的DMEM 培養(yǎng)液。
4.lip 2000 高效 DNA TR轉(zhuǎn)染試劑不能vortex 或離心，宜緩慢晃動(dòng)混勻。
5.轉(zhuǎn)染試劑使用后請(qǐng)立即蓋好蓋子，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露空氣中。
6.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
