產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

5min 即用型封閉液是一款無蛋白成分快速 Western Blot 的封閉液，可用于高效快速的封閉轉(zhuǎn)膜后的 NC 或 PVDF 膜，可替代脫脂奶粉、BSA 等傳統(tǒng)封閉液。

整個(gè)封閉過程僅需 5 分鐘，封閉效果可等同或者優(yōu)于脫脂奶粉、BSA 等傳統(tǒng)封閉液，幫助用戶獲得 WB 更好的信號(hào)目的條帶與更低的背景結(jié)果。該試劑為無蛋白成分封閉液，可很好的避免內(nèi)部成分與抗體發(fā)生交叉反應(yīng)，適用性更加廣泛，普遍適用于常規(guī)抗體與磷酸化的抗體的 WB 檢測(cè)。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. 超快免洗封閉——5min 完成封閉，無需洗滌，直接孵育一抗；

2. 無蛋白成分——很好的避免因封閉液成分中的蛋白與抗體非特異性結(jié)合導(dǎo)致的非特異性條帶出現(xiàn)或者                               高背景；

3. 適用范圍廣——通用于常規(guī)抗體，磷酸化抗體，生物素標(biāo)記抗體；

4. 抗原抗體結(jié)合增強(qiáng)配方——可有效增加抗原抗體結(jié)合能力，更好的目的條帶信號(hào)，更低背景。

操作步驟：

1.將轉(zhuǎn)膜完成后的 NC 或者 PVDF 膜放入適宜體積的將 Y-Tec 5min 即用型封閉液中（注意需完全覆蓋膜，對(duì)于 6.5*8.5cm 的整膜，推薦最少使用量 20ml），置于水平搖床上，室溫條件下振蕩孵育 5 分鐘。

2.封閉后直接孵育一抗抗體（注意：該步驟不要用 TBST 或 PBST 洗滌，直接加入一抗孵育即可，洗滌反而會(huì)影響封閉效果），一抗孵育后續(xù)步驟按照正常實(shí)驗(yàn)流程即可。

保存條件 ：

4℃保存，保質(zhì)期 18 個(gè)月。

F&Q：

1.該封閉液也可能存在一些不適用的實(shí)驗(yàn)體系，因此對(duì)于一些特殊的實(shí)驗(yàn)或抗體效果不能達(dá)到預(yù)期的，可以考慮用更適宜的封閉體系來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；
2.信號(hào)弱或者無信號(hào)：
（1）目的蛋白樣品上樣量過少或者抗體濃度過低，可加大上樣量或者增加一抗工作抗體濃度；
（2）轉(zhuǎn)膜效率過低導(dǎo)致膜上無目的蛋白或者目的蛋白過少，重新轉(zhuǎn)膜后用麗春紅染色檢驗(yàn)轉(zhuǎn)膜效果正常后          再進(jìn)行后續(xù)封閉與一抗二抗孵育；
（3）抗體效價(jià)低，特異性差等原因造成，需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況進(jìn)行調(diào)整。
3.背景高：
（1）抗體使用量過多或者蛋白上樣量過大會(huì)導(dǎo)致大量的非特異性條帶出現(xiàn)；
         解決方案：降低蛋白上樣量或者抗體濃度即可避免。
（2）轉(zhuǎn)印膜的洗滌時(shí)間次數(shù)過少或者時(shí)間過短；
         解決方案：補(bǔ)充 TBST 洗滌次數(shù)與洗滌膜的時(shí)間。
（3）試劑或儀器設(shè)備被污染等原因造成；
         解決方案：需要根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體情況進(jìn)行調(diào)整。

友情提醒：實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套操作。