LIP2000轉染試劑 

4°C儲存 ，避光保存2年

lip2000高效DNA TR是一種新型的陽離子脂質體轉染試劑適合于將核酸DNA轉染入真核細胞，具有低細胞毒性；對多種類型的細胞都具有高轉染效率；轉染時血清的存在不影響轉染效率的優點。

lip2000高效DNA TR轉染試劑對于常見的哺乳動物細胞具有非常高的轉染效率、重復性好、操作簡單、無明顯的細胞毒性，并且對于貼壁細胞和懸浮細胞都適用。

lip2000高效DNA TR主要適用于DNA 等單一成分的細胞轉染。

lip2000高效DNA TR轉染過表達質粒后，通常24～48 h后達到較高的蛋白表達水平，并且很多情況下蛋白表達量在轉染后48 h 顯著高于轉染后24 h。

lip2000高效DNA TR轉染細胞時，基本不受細胞培養液中血清影響，即可以在血清存在的情況下進行細胞轉染。但為了取得最佳的轉染效果，推薦轉染時使用不含抗生素培養液。轉染后不必去除轉染液，或者改變或添加培養基，但轉染4～6 h 后可去除轉染液。

產品信息

產品名稱	貨號	規格
Lip2000轉染試劑	HZ-015	1.5ml

使用方法

DNA轉染

對大多數細胞來說，DNA (ug) 與lip2000高效DNA TR (ul) 的比例為1:2~1:3。轉染時高的細胞密度可以得到高的轉染效率和表達水平，并能減少細胞毒性。

1. 以24孔板為例

貼壁細胞：轉染前一天，用500 ul不含抗生素的培養基接種0.5～2×105 細胞，使之第二天能達到80～90% 融合。

懸浮細胞：在準備DNA-TR LIP2000 DNA復合物之前，用500 ul不含抗生素的培養基接種4～8×105 細胞即可。

2. 對每個轉染樣品，進行以下操作

a. 在 eppendorf 管里分別加入50 ul Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和0.8 ug DNA輕柔混勻（不能渦旋或離心），制成DNA稀釋液。

b. 在另一個eppendorf管里分別加入50 ul Opti-MEM I ReLipced Serum Medium和2.0 ul lip2000高效DNA TR（注意用前先混勻），輕柔混勻，制成lip2000高效DNA TR 稀釋液，室溫靜置5分鐘。

c. 將DNA稀釋液和lip2000高效DNA TR稀釋液混合，輕柔混勻，室溫靜置20分鐘，形成DNA-lip2000高效DNA TR復合物。DNA - lip2000高效DNA TR復合物在室溫下可穩定存在6小時。

3. 將DNA-lip2000高效DNA TR復合物加入到接種好的細胞中，將培養板輕輕地前后搖動，使復合物分散均勻。

4. 在37℃ CO2培養箱中培養4～6小時后更換培養基，繼續培養18～48小時。

5. 如果要篩選穩定細胞株，則在轉染24小時后將細胞按照1:10或更高的比例接種到新鮮培養基中，第二天加入選擇性培養基進行篩選。

 優化DNA轉染

質粒DNA轉染的優化為達到最高的轉染效率和降低細胞毒性的影響，可以對DNA和lip2000高效DNA TR的比例以及細胞密度進行優化，一般在1:0.5~1:5的范圍內優化DNA（ug）和lip2000高效DNA TR（ul） 的比例。

 不同細胞培養板中轉染時培養基、核酸及lip2000高效DNA TR用量

細胞培養板	每孔面積	培養基用量		DNA轉染
		鋪板培養基	稀釋培養基	DNA	轉染試劑
96 well	0.3 cm2	100 ul	2×25 ul	0.2 ug	0.5 ul
24 well	2 cm2	500 ul	2×50 ul	0.8 ug	2.0 ul
12 well	4 cm2	1 ml	2×100 ul	1.6 ug	4.0 ul
6 well	10 cm2	2 ml	2×250 ul	4.0 ug	10 ul
60 mm	20 cm2	5 ml	2×0.5 ml	8.0 ug	20 ul
10 cm	60 cm2	15 ml	2×1.5 ml	24 ug	60 ul

 Lip轉染試劑用于不同細胞轉染時用量參考（以.96孔板為例）

細胞型號	培養基	每孔細胞數	DNA的量	轉染試劑量
293H	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul
293FT	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul
293E	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul
293F	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul
COS7	DMEM	1.5×104	0.4 ug	0.5 ul
hela	DMEM	2×104	0.3 ug	0.5 ul
Caco2	MEM	3.5×104	0.3 ug	0.75 ul
BHK21	MEM	2×104	0.2 ug	0.5 ul
CHO-DG44	DMEM+HT+pro	2×104	0.5 ug	0.5 ul
RAW264.7	DMEM	3×104	0.2 ug	0.5 ul

注意事項

1.使用高純度的DNA有助于獲得較高的轉染效率。

2.轉染前細胞必須處于良好的生長狀態。

3.需自備不含抗生素的無血清培養液或Opti-MEM?培養液或普通的DMEM 培養液。

4.lip 2000 高效 DNA TR轉染試劑不能vortex 或離心，宜緩慢晃動混勻。

5.轉染試劑使用后請立即蓋好蓋子，避免長時間暴露空氣中。

6.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。