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一、貼壁細胞

1.用 75%酒精噴灑整個瓶消毒，將其平躺置于培養箱中進行 2-3 小

時的緩沖，

.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養液去掉，

再往其中加入 5-6mL 新鮮培養基并置于細胞培養箱中培養，根據

細胞生長狀況及培養基顏色變化對其進行換液以及傳代；

2.待細胞長滿瓶底面積 80%-90%，需要對其進行傳代，第一次傳代

比例為 1:2。

3 傳代步驟：將 0.25%含 EDTA 胰酶置于 37°預熱，倒掉培養瓶中的

培養基，往培養瓶中加入 1mlPBS，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加 1ml

預熱好的胰酶，置于 37°孵育消化（第一次消化需時常取出置于顯

微鏡下觀察，以顯微鏡下細胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細胞脫落

為最佳消化時間，記錄最佳消化時間，以便于下次消化），消化好

后加入 1ml 完全培養基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細胞，

使之完全脫落，然后收集細胞懸液，1200rpm 離心 3min，棄上清，

加入完全培養基重懸細胞，進行傳代。

二、懸浮細胞

1.用 75%酒精噴灑整個瓶消毒，然后置于無菌操作臺，打開瓶口，

輕輕吹打后，將其中的細胞懸液轉移到離心管中，然后 1200rpm 離

心 3min，去上清；

2.將離心好的細胞轉移至 T-25 瓶中，并加入 5-6mL 新鮮培養基，然

后將其置于細胞培養箱中培養，根據細胞生長狀況及培養基顏色變

化對其進行換液（離心后去舊液，加入新鮮培養基）；

3.顯微鏡觀察細胞數目比較多時，對其進行傳代，第一次傳代比例

為 1:2（離心后平均分成兩瓶培養）。

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