人原代心肌成纖維細(xì)胞

種屬：人

組織來源：正常心臟組織

傳代比例：1:2傳代

完全培養(yǎng)基配置：基礎(chǔ)培養(yǎng)基500ml；生長添加劑5ml；胎牛血清10ml；雙抗5ml

簡介：心臟是脊椎動物身體中最重要的一個器官，主要功能是提供壓力，把血液運(yùn)行至身體各個部分。心臟的作用是推動血液流動，向器官、組織提供充足的血流量，以供應(yīng)氧和各種營養(yǎng)物質(zhì)，并帶走代謝的終產(chǎn)物（如二氧化碳、無機(jī)鹽、尿素和尿酸等），使細(xì)胞維持正常的代謝和功能，心臟中，心肌成纖維細(xì)胞約占正常心肌組織細(xì)胞總數(shù)的60%- 70%，是心臟中非心肌細(xì)胞的主要組成部分，廣泛存在于心臟組織中，包圍心肌細(xì)胞，連接心肌細(xì)胞間質(zhì)，與缺血性心臟病、炎癥、肥大、梗死等病理狀態(tài)密切相關(guān)。

形態(tài):長梭狀細(xì)胞樣

生長特征:貼壁生長

細(xì)胞檢測:纖維連接蛋白（Fibronectin）免疫熒光鑒定，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

倍增時間:每周 2 至 3 次

換液頻率:2-3天換液一次

培養(yǎng)條件:氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

凍存條件:凍存液：90%FBS，DMSO 10%,或使用非程序凍存液

產(chǎn)品使用:僅限于科學(xué)研究，不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用。

細(xì)胞接收處理流程：

1：觀察有無破損漏液情況，如有請拍照及時聯(lián)系客服。

2：酒精消毒培養(yǎng)瓶表面后顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，觀察拍照后不用打開培養(yǎng)瓶蓋 放入培養(yǎng)箱靜止2-3小時穩(wěn)定 細(xì)胞狀態(tài)。

3：請按照細(xì)胞操作指南進(jìn)行第一次傳代凍存處理。

4：產(chǎn)品隨貨會附帶細(xì)胞說明書、細(xì)胞培養(yǎng)操作指南、細(xì)胞鑒定、支原體檢測報告。

5：若產(chǎn)品有異常或其他疑問，可隨時聯(lián)系客服；轉(zhuǎn)至技術(shù)支持。

常溫細(xì)胞收貨當(dāng)天處理方式

1.收到常溫細(xì)胞后，及時拍照記錄有無漏液/瓶身破損現(xiàn)象。

2.鏡下觀察有無微生物污染現(xiàn)象，拍照記錄不同倍數(shù)鏡下細(xì)胞狀態(tài)和有無染菌現(xiàn)象， 方便后續(xù)售后處理。

3.消毒后，更換贈送的完全培養(yǎng)液放置培養(yǎng)箱靜止2-3小時。如細(xì)胞有多數(shù)懸浮細(xì)胞需要離心收集重新接種止培養(yǎng)瓶。

4.觀察細(xì)胞密度若超過 80%則可正常傳代處理(有的原代細(xì)胞不可傳代，請根據(jù)實(shí)際情況決定)， 首次傳代推薦比例 1：2 到 1：3（按實(shí)際收貨細(xì)胞密度決定，若不確定 可聯(lián)系技術(shù)支持）；若細(xì)胞密度不到 80%則可繼續(xù)培養(yǎng)，注意擰松瓶蓋或更換透氣瓶蓋；懸浮細(xì)胞注意離心所有培養(yǎng)基以收集細(xì)胞。

5.由于氣溫，運(yùn)輸?shù)扔绊懺斐少N壁細(xì)胞漂浮的，請將細(xì)胞離心收集后在離心管中消化后進(jìn)行傳代（參考附件），或及時聯(lián)系技術(shù)支持進(jìn)行指導(dǎo)傳代。

貼壁細(xì)胞傳代：1.從培養(yǎng)容器中吸出用過的細(xì)胞培養(yǎng)基并丟棄；

2.從與貼壁細(xì)胞層相對的容器一側(cè)輕輕加入沖洗液以避免攪動細(xì)胞層，前后搖晃容器數(shù)次

3.從培養(yǎng)容器中吸出沖洗液并丟棄，向培養(yǎng)瓶中加入預(yù)熱的胰酶；胰酶量應(yīng)足以覆蓋細(xì)胞層(T25為1ml)；

4.將培養(yǎng)容器在室溫下孵育約 2分鐘（請注意實(shí)際孵育時間根據(jù)所用細(xì)胞系不同而有所差異）；

5.在顯微鏡下觀察細(xì)胞解離情況；如果解離程度未達(dá) 90%，可將孵育時間延長幾分鐘，每 30 秒鐘檢查一次解離情況；

6.細(xì)胞解離程度大于等于 90%時，傾斜培養(yǎng)容器，使細(xì)胞上液體盡快流盡；加入所用解離劑兩倍體積的預(yù)熱完全生長培養(yǎng)基；吹打細(xì)胞層表面數(shù)次，使培養(yǎng)基分散；

7.將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15mL 無菌離心管中，以 200×g 的離心力離心 3-5 分鐘

（請注意離心速度和時間依細(xì)胞種類不同而有所差異）；

8.用最少體積的預(yù)熱完全生長培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將細(xì)胞懸液按照推薦比例稀釋，并將適量體積的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的細(xì)胞培養(yǎng)容器中，把細(xì)胞放回培養(yǎng)箱（注：如果使用培養(yǎng)瓶，將其放入培養(yǎng)箱前應(yīng)將瓶蓋旋松，以便進(jìn)行充分的氣體交換，除非您使用的是通氣式培養(yǎng)瓶和透氣性瓶 蓋）。

懸浮細(xì)胞傳代：將 T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中 1000rpm 離心 5min，收集上清，加 1- 2ml 完全培養(yǎng)基重懸，按 1:2 比例進(jìn)行比例傳代分到新T25瓶中，補(bǔ)充5-8ml/瓶新的完全培養(yǎng)基 ， 最后放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。